BiozellenCM®  小鼠肝胆管类器官分化培养基

（BiozellenCM® Mouse Liver Ductal Organoid Differentiation Medium）

Catalog No      B-MM-00005-100、 B-MM-00005-500

Specification    100ml、500ml

 一、产品介绍

 BiozellenCM® 小鼠肝胆管类器官分化培养基是一种化学成份明确的无血清培养基，用于将扩增培养好的小鼠肝胆管类器官分化成为小鼠肝细胞样细胞，可用于肝脏发育、疾病模型以及肝毒性评价等研究。

二、产品信息

 三、小鼠肝胆管类器官分化培养基 I 和 II 配置

1.  首次使用时，冰上解冻小鼠肝胆管类器官分化培养基添加剂 A 和 B，解冻后的添加剂或一次性配置并使用，或分装于-20℃冻存；

2. 小鼠肝胆管类器官分化培养基 I 配置：按比例将 A 和 B 添加至小鼠肝胆管类器官基础培养基中，混匀后置于  2-8 ℃保存，建议 2-3 周内使用；（以 10mL 为例：200μL 添加剂 A + 200μL 添加剂 B + 9.6 mL 小鼠肝胆管类器官基础培养基）。

2. 小鼠肝胆管类器官分化培养基 II 配置：按比例将 A 和 B 添加至小鼠肝胆管类器官基础培养基中，混匀后置于  2-8 ℃保存，建议 2-3 周内使用；（以 10mL 为例：200μL 添加剂 A + 200μL 添加剂 B + 100μL 添加剂 C + 9.5mL 小鼠肝胆管类器官基础培养基）。

四、 需要但不包含的其他试剂与耗材

 五、分化前类器官接种操作

1.  经小鼠肝胆管类器官扩增培养基（B-MM-00004）培养的肝胆类器官，采用类器官传代消化液（B-R-00002-100），并按照传代操作说明获得类器官悬液，按如下方式计数：

      1）取10μL 肝胆管类器官悬液，显微镜下观察和计算 Fragment 数量（30-100um）；

      2）重复三次计数，并计算平均值；

      3）根据体积计算 Fragment 总数。

2.  （冰上操作）以大约500 fragments/uL，使用 BiozellenGel (B-P-00007-10)）重悬细胞，并以 30uL/滴 接种类器官至 24 孔板中；

    3.  接种完成后迅速将接种后的细胞孔板翻转，置于37℃，5%  CO2 培养箱内孵育 10-15  min 使基质胶凝固；

    4.  待基质胶凝固后，加入1 mL 肝胆管类器官扩增培养基至浸没基质胶滴，并转移至  37℃，5% CO2  培养箱内培养；

    5.  接种第 3 天换液（ 肝胆管类器官扩增培养基），继续培养；

    6.  培养至第 5 天进入类器官分化操作。

     备注：建议后续用于RNA 或蛋白提取的胶滴（Dome）不少于 4 滴。

 六、小鼠肝胆管类器官分化操作步骤

1.  经肝胆管类器官接种操作第 5 天，开始以下操作；

2.  将配置的小鼠肝胆管类器官分化培养基  I 和  PBS 于常温稍预热。并确认小鼠肝胆管类器官分化培养基中已加入添加剂 A 和 B；

3.  小心吸弃培养基，吸取 1mL PBS  至每孔；

4.  小心吸弃漂洗液，吸取 1mL 小鼠肝胆管类器官分化培养基 I 至每孔，在 37℃，5%  CO2 培养箱内继续培养（Day0）。

5.  分化至 Day 12 时，小心吸弃上清培养基， 吸取 1mL PBS  至每孔；

6.  小心吸弃漂洗液，吸取 1mL 小鼠肝胆管类器官分化培养基 II 至每孔，在 37℃，5%  CO2 培养箱内继续培养。

7.  待分化至 Day 15 时，获得类器官进行后续表征或功能分析。

七、友情提示

1.  本试剂仅供科研使用，使用前请仔细阅读本说明书。

2.  如遇到特殊样本或其他未涉及问题，请联系公司售后技术支持，我们将提供免费的技术咨询服务，再次感谢您的信任!

                                                                                                              仅供研究使用     

BiozellenMM 小鼠肝胆管类器官分化培养基 B-MM-00005.pdf