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人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)
产品概述:
人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)
Catalog No CL010003
Specification 1ml
一、产品信息
产品名称 | 产品货号 | 规格 |
人主动脉平滑肌细胞(原代永生化) | CL010003 | 1ml |
二、保存条件
液氮保存,有效期1年。
三、细胞描述:
产品名称 |
人主动脉平滑肌细胞(原代永生化) |
组织来源 |
主动脉组织 |
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5×105 cells~1×106 cells/Vial |
方法简介 |
分离的人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)是原代人主动脉平滑肌细胞经慢病毒转染的方式携带SV40T 基因,经抗生素和传代筛选获得。 |
质量检测 |
分离的人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)经α-SMA 免疫荧光鉴定,纯度可达 90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 |
培养信息 | 1、培养基:人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)完全培养基(含FBS、生长添加剂、 Penicillin、Streptomycin 等) 2、产品货号:CL010003 3、换液频率:每 2-3 天换液一次 4、生长特性:贴壁 5、传代比例:第一次 1:2,之后 1:2-1:6 6、传代特性:大于 5-10 代 7、消化液:0.25%胰蛋白酶 8、人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)体外培养周期有限;建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养,以此保证该细胞的最佳培养状态 |
四、人主动脉平滑肌细胞(原代永生化)细胞传代步骤
* 客户收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1、细胞复苏
1) 将水浴锅预热至 37℃,取无菌 15mL 离心管并加入 9 mL 平滑肌细胞完全培养基;
2) 将细胞从液氮罐中取出放入 PE 手套中,迅速没入水浴锅中,摇晃冻存管加入溶解,一般 1-2min 内即可全部溶解;
3) 在生物安全柜中将吸取全部冻存管中的细胞悬液至 9 mL 完全培养基中,300 g 离心 3min,小心吸弃上清;
4) 用适量的平滑肌细胞完全培养基重悬细胞沉淀,接种到无菌培养瓶或培养皿中,放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中静置培养。
2、细胞传代
1) 吸培养瓶/培养皿中的培养基,用 PBS 清洗细胞一次;
2) 添加适量的 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶/培养皿中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,37℃温浴 5min 以上;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入 5mL 完全培养基终止消化;
3) 用移液枪反复吹打培养瓶/培养皿直至贴壁细胞均脱落,将细胞悬液转移到 15mL 离心管中,300 g 离心 3min,小心吸弃上清;
4) 按传代比例添加适量的完全培养基重悬,接种至新的培养瓶/培养皿传代,置于 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中静置培养;
5) 待细胞完全贴壁后,培养观察并用于后续实验;
3、细胞冻存
1) 按照 40% 平滑肌细胞培养基 + 10% DMSO + 50% FBS,提前配置细胞冻存液;
2) 取生长状态良好的细胞,吸弃培养瓶/培养皿中的培养基,用 PBS 清洗细胞一次;
3) 添加适量的 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶/培养皿中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,37℃温浴 5min 以上;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入 5mL 完全培养基终止消化;
4) 用移液枪反复吹打培养瓶/培养皿直至贴壁细胞均脱落,取 10μL 细胞悬液进行台酚蓝细胞计数;
5) 将细胞悬液转移到 15mL 离心管中,300 g 离心 3min,小心吸弃上清;
6) 根据细胞总数,加入适量的细胞冻存液,调整细胞浓度为 1 × 106 Cells/mL~1 × 107 Cells/mL;
7) 以 1mL 每管分装至冻存管中,将冻存管放置程序降温盒后放入-80℃ 冰箱过夜;
8) 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮罐中长期保存。
4、注意事项
1) 培养基于 4℃条件下可保存 3 个月。
2) 在细胞培养过程中,请注意保持无菌操作。
3) 消化过程中,胰酶消化时间不宜过长,否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4) 该细胞只用于科研。
5) 由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同,以上方法仅供各实验室参考
仅供研究使用