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人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）
产品概述：
人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）
Catalog No CL010003
Specification 1ml
一、产品信息
产品名称 | 产品货号 | 规格 |
人主动脉平滑肌细胞（原代永生化） | CL010003 | 1ml |
二、保存条件
液氮保存，有效期1年。
三、细胞描述：
产品名称 |
人主动脉平滑肌细胞（原代永生化） |
组织来源 |
主动脉组织 |
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5×105 cells~1×106 cells/Vial |
方法简介 |
分离的人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）是原代人主动脉平滑肌细胞经慢病毒转染的方式携带SV40T 基因，经抗生素和传代筛选获得。 |
质量检测 |
分离的人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）经α-SMA 免疫荧光鉴定，纯度可达 90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 |
培养信息 | 1、培养基：人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）完全培养基(含FBS、生长添加剂、 Penicillin、Streptomycin 等) 2、产品货号：CL010003 3、换液频率：每 2-3 天换液一次 4、生长特性：贴壁 5、传代比例：第一次 1:2，之后 1:2-1:6 6、传代特性：大于 5-10 代 7、消化液：0.25%胰蛋白酶 8、人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态 |
四、人主动脉平滑肌细胞（原代永生化）细胞传代步骤
* 客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1、细胞复苏
1） 将水浴锅预热至 37℃，取无菌 15mL 离心管并加入 9 mL 平滑肌细胞完全培养基；
2） 将细胞从液氮罐中取出放入 PE 手套中，迅速没入水浴锅中，摇晃冻存管加入溶解，一般 1-2min 内即可全部溶解；
3） 在生物安全柜中将吸取全部冻存管中的细胞悬液至 9 mL 完全培养基中，300 g 离心 3min，小心吸弃上清；
4） 用适量的平滑肌细胞完全培养基重悬细胞沉淀，接种到无菌培养瓶或培养皿中，放入 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中静置培养。
2、细胞传代
1） 吸培养瓶/培养皿中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次；
2） 添加适量的 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶/培养皿中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，37℃温浴 5min 以上；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入 5mL 完全培养基终止消化；
3） 用移液枪反复吹打培养瓶/培养皿直至贴壁细胞均脱落，将细胞悬液转移到 15mL 离心管中，300 g 离心 3min，小心吸弃上清；
4） 按传代比例添加适量的完全培养基重悬，接种至新的培养瓶/培养皿传代，置于 37℃、5% CO2 的细胞培养箱中静置培养；
5） 待细胞完全贴壁后，培养观察并用于后续实验；
3、细胞冻存
1） 按照 40% 平滑肌细胞培养基 + 10% DMSO + 50% FBS，提前配置细胞冻存液；
2） 取生长状态良好的细胞，吸弃培养瓶/培养皿中的培养基，用 PBS 清洗细胞一次；
3） 添加适量的 0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶/培养皿中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，37℃温浴 5min 以上；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入 5mL 完全培养基终止消化；
4） 用移液枪反复吹打培养瓶/培养皿直至贴壁细胞均脱落，取 10μL 细胞悬液进行台酚蓝细胞计数；
5） 将细胞悬液转移到 15mL 离心管中，300 g 离心 3min，小心吸弃上清；
6） 根据细胞总数，加入适量的细胞冻存液，调整细胞浓度为 1 × 106 Cells/mL~1 × 107 Cells/mL;
7） 以 1mL 每管分装至冻存管中，将冻存管放置程序降温盒后放入-80℃ 冰箱过夜；
8） 从-80℃冰箱取出冻存管迅速转移到液氮罐中长期保存。
4、注意事项
1） 培养基于 4℃条件下可保存 3 个月。
2） 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3） 消化过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4） 该细胞只用于科研。
5） 由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
仅供研究使用
