-
ipsc, cell
产品概述：
ipsc, cell
Catalog No CL010002
Specification 1ml
一、产品信息
产品名称 | 产品货号 | 规格 |
ipsc, cell | CL010002 | 1ml |
二、保存条件
负20°保存，有效期1年。
三、细胞描述：
将人皮肤细胞诱导成 iPSC 细胞，重编程转录因子 OCT4、SOX2、KLF4、MYC
来源性别: 男性
疾 病：帕金森症
年 龄：63 岁
细胞来源：2013 年引进
生物安全等级：BSL-2
培养液：见【培养方案】
冻存日期/冻存代数：详见冻存管标识
参考传代周期：4-5 天
参考传代比例：1:4
参考换液频率：每天
冻存液：见【培养方案】
细胞状态：克隆状，贴壁生长
支原体检测结果：阴性
STR 鉴定结果：
D5S818: 11,12；
D13S317: 11,11；
D7S820: 10,12；
D16S539: 10,11；
vWA: 17,18；
THO1:7,7；
Amelogenin: X,Y；
TPOX: 8,11；
CSF1PO: 10,12.
四、【培养方案】：建议使用BiozellenCM人多能干细胞培养基及配套培养体系进行培养
1. 试剂和材料
BiozellenCM人多能干细胞培养基（产品号B-SM-00002-500）包括
组成 | 产品号 | 规格规格 | 储存温度&质保期 |
BiozellenCM® 人多能干细胞基础培养基 | B-SM-00002-500 | 500 mL | 2-8℃，避光保存12 个月 |
BiozellenCM® 人多能干细胞培养基添加剂（50×） | B-SM-00002-A | 10 mL | -20℃，避光保存12 个月 |
2. 所需的其他试剂和材料
名称 | 产品号 | 规格规格 |
温和型细胞消化液 | B-SM-00003-100 | 100 mL |
干细胞基质胶，无酚红 | B-P-00011-10 | 10 mL |
Y27632 | ||
DPBS缓冲液 | ||
DMEM/F-12基础培养基 | ||
细胞培养孔版 |
3.试剂的准备
3.1 人多能干细胞培养基的准备
3.1.1 初次使用时，37℃水浴解冻人多能干细胞培养基添加剂（B-SM-00002-A），解冻后的各组分试剂或一次性配置并使用，或分装于-20℃冻存（不超过12个月）；
3.1.2 人多能干细胞培养基配置：按照2% 的比例，将解冻后的人多能干细胞培养基添加剂（B-SM-00002-A）添加至人多能干细胞基础培养基中，混匀后置于 2-8 ℃避光保存，建议 1个月内使用。如规定时间内不能用尽，建议分装于-20℃冻存（不超过12个月）。
3.2基质胶分装与孔板包被
3.2.1 应分装和冷冻保存 BiozellenGel,干细胞基质胶（B-P-00011-10）。 分装后的小包装可在-20°C 下最多储存24 个月。
3.2.2 提前一天将分装的基质胶至于4°C冰箱中解冻。解冻后的基质胶凝胶始终置于冰上，并使用预先冷却的培养基和移液器，以避免产品凝胶化。
3.2.3 用预冷的DMEM/F12 基础培养基稀释基质胶（稀释比例为1:50），以 1mL/孔加入预冷的 6 孔板中，轻轻摇动板子以确保混合液均匀地覆盖在板上。
3.2.4 将 6 孔板转移到37°C的培养箱中至少孵育1h。 在培养板可供使用之前，请勿移除包被液。如不立即使用，可将包被孔板密封，放置于2-8 ℃最多储存7 天。
3.2.5 使用前吸弃包被液。如已将培养板在 2 - 8℃下储存，则在移除包被液之前，将培养板在培养箱 (37℃) 下放置 30 min。
3.3 Y27632 配置
3.3.1 27632 粉末溶解在 DPBS 中，配成浓度为 10mM 的储存液，0.22um 滤膜过滤除菌。分装后冷冻于-20 ℃，6 个月内使用。
3.3.2 Y27632 提高复苏和传代后的克隆形成率，所以只在复苏步骤和传代步骤添加，换液时不添加。
4、iPSC 细胞复苏
4.1 将iPSC冻存管放在 37 °C 的水浴中快速融化细胞，并在水浴时不停摇晃冷冻管，以确保快速解冻。
4.2 开盖前用 75％乙醇或等效消毒剂对冷冻管进行消毒。
4.3 用无菌移液管将冷冻保护剂 / 细胞混合物转移到15 mL离心管中。再吸6 mL 预温的人多能干细胞培养基，并轻柔混匀。
4.4 将细胞以300 x g 离心 3 min，小心吸弃上清液。
4.5 用含有Y27632的培养基（终浓度10μM）轻轻重悬 iPSC，然后将其转移到铺好的 6 孔板中。轻轻摇动板子以均匀分布细胞；
4.6 将 6 孔板放回 37°C 的培养箱中培养；
4.7 每天更换培养基(不含Y27632)。在解冻后大约 5 - 7 天内检查可进行传代的未分化集落（有密集的中心）。
5、iPSC细胞传代
当细胞集落变得较大、中心变得密集和明亮（对比其边缘）而相邻的集落开始融合时，这时可进行传代。根据接种的细胞团的大小和密度，传代周期为 5 天左右。如果太早对集落进行传代或传代太过频繁，则细胞可能吸附不好、产量将会减少且细胞可能分化。如果太晚对集落进行传代，培养物将开始显示分化迹象（特点是细胞类型出现不同的形态）。
5.1 将无菌DPBS、温和型细胞消化液（B-SM-00003-100）和人多能干细胞培养基温热至室温。
5.2 吸弃培养基，加入 DPBS 漂洗细胞一次。
5.3 向每孔加入1 mL 温和型细胞消化液。将板在 37°C 下孵育 3-5 min。
5.4 当显微镜下观察大部分细胞变圆、脱落时，小心加入 5 mL DMEM/F-12或人多能干细胞培养基终止。
5.5 使用移液枪小心吹打吹打孔底细胞，并将细胞悬液吸取至15 mL离心管中，300 x g 离心 3 min，小心吸弃上清液。
5.6 根据传代比例，吸取适量的含有10 μM Y27632的人多能干细胞培养基重悬细胞，并接种至新的包被孔板中。
备注：一般传代周期为 5 天左右，传代比例为 1：3-1：6。如果集落过于密集或过于稀疏，则下一次传代时相应地调整传代比例。
5.7 每天更换培养基(不含Y27632)。
6、iPSC细胞冻存
6.1 准备无菌细胞冻存管、程序性冻存盒；DPBS、温和型细胞消化液（B-SM-00003-100）、无血清细胞冻存液和人多能干细胞培养基提前温热至室温。
6.2 为提高冻存活率，建议对处于对数生长期（汇合度70-80％）的人多能干细胞培养基进行冻存操作。
6.3 取出细胞培养孔板，吸弃培养基后加入 DPBS 漂洗细胞一次。
6.4 向每孔加入1 mL 温和型细胞消化液。 将板在 37°C 下孵育 3-5 min。
6.5 当显微镜下观察大部分细胞变圆、脱落时，小心加入 5 mL DMEM/F-12或人多能干细胞培养基中和。
6.6 使用移液枪小心吹打吹打孔底细胞，并将细胞悬液吸取至15 mL离心管中，300 x g 离心 3 min，小心吸弃上清液。
6.7 将细胞重悬于 1mL 含有10 μM Y27632的人多能干细胞培养基中，取10μL细胞悬液计数。
6.8 300 x g 离心 3 min，小心吸弃上清液。根据细胞总数加入适量预冷的无血清细胞冻存液（含10 μM Y27632），重悬后以 1mL分装至细胞冻存管中。
备注：建议冻存比例为1-2 × 106 /管。
6.9 将细胞冻存管放入程序性冻存盒中，并转移到-80°C的超低温冰箱中过夜。将细胞再转移至液氮灌中。
仅供研究使用
